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复旦大学博士论文的缺点是对低丰度蛋白 包括膜蛋白和其他低丰度

归档日期:07-04       文本归类:对比灵敏度      文章编辑:爱尚语录

  复旦大学博士论文的缺点是对低丰度蛋白 包括膜蛋白和其他低丰度蛋白 分辨率低 分子量过大 及过小 都难以分离 对疏水性蛋白质、极性蛋白蛋白质分离困难 手工步骤多、操作费时等 】。如何提高双向凝胶电泳的分离容量、灵敏度和分辨率以及对蛋白质差异表达的准确检测是目前双向凝胶电泳技术发展的关键问题。近几年针对

  复旦大学博士论文的缺点是对低丰度蛋白 包括膜蛋白和其他低丰度蛋白 分辨率低 分子量过大 及过小 都难以分离 对疏水性蛋白质、极性蛋白蛋白质分离困难 手工步骤多、操作费时等 】。如何提高双向凝胶电泳的分离容量、灵敏度和分辨率以及对蛋白质差异表达的准确检测是目前双向凝胶电泳技术发展的关键问题。近几年针对双向电泳技术上的一些缺陷和蛋白质组学研究对蛋白质分离技术的较高要求 双向电泳在技术上的改进取得了很大进步。 们在分离大鼠海马神经元蛋白质时应用窄范围 梯度胶条结合两种浓度的大面积 聚丙烯酰胺凝胶 大大提高了双向电泳的分辨率 而且对低丰度蛋白质分离效果较好。激光捕获显微切割术 可降低 分析样品中组织的异质性 提高分辨率啪 并有助于比较正常与肿瘤组织蛋白质表达的差异。 提出差异凝胶电泳技术 把传统的 方法和多重荧光标记分析相结合在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记的样品 并第一次引入了内标的概念 极大地提高了结果的准确性、可靠性和重复性。 其它蛋白质分离方法目前 二维毛细管电泳 、二维色谱 世纪年代由 提出的高效分离分析技术。即在高电场强度作用下对毛细管 内径 中的待测样品按分子质量、电荷、电泳迁移率等差异进行有效分离。主要包括毛细管区带电泳、毛细管等电聚焦和筛板 毛细管电泳。该技术弥补了双向凝胶电泳无法实现自动化分析的不足 并可用于分子量范围不适用于双向电泳样品的检测 对单一样品尤为适用 但对复杂样品的分离尚不完全船别。近年来 色谱技术的发展为蛋白质和多肽或亚基的分离分析提供了新的手段。色谱技术是利用各种物质在固定相和流动相之问不同的分配系数 使其在相对运动着的两相问经反复多次分配 以不同速度移动 从而获得分离的方法。按两相状态来分类 有气相色谱法 和液相色谱法 两种 而其中的 是蛋白质组学非凝胶蛋白分离技术中最常用的方法。高效液相色谱是利用高压输液泵驱使带有样品的流动相通过装填固定相的色谱柱 利用固液相之间的分配机理对混合物样品溶液进行分离的方法。例如对奶粉中三聚氰胺的检测嘲。多维液相分离系统根据分离机理不同的色谱柱 按照蛋白质固有的理化性质不同进行分离 如等电点、分子量、疏水性等 通过独有的液相色谱分离工作站 使用包括离子交换色谱 等电点聚焦 反向色谱等手段与串联质谱技术的完美结合 对一些 无法解决的蛋白鉴定 如低丰度、碱性和极酸性蛋白、膜蛋白、大分子量和小分子量蛋白等 将之分离鉴定 将蛋白组研究引向更加深入的层次。多维液相色谱技术具有许多优点 如分离速度快 分析过程容易自动化 由于对蛋白质 多肽的分离都是在液相环境下进行的 对各种理化性质的蛋白质 多肽具有很好的兼容性 样品的损失较小 适合蛋白质组研究的要求比 。色谱技术除了直接对蛋白分离分析外 常与质谱技术联用。随着色谱理论及色谱柱制作技术的发展 各种液相色谱串联策略层出不穷 为蛋白质组研究提供了强大的手段。同位素编码的亲和标签技术 等他司人首先提出现在己成为差异蛋白质组学中的主要技术。基本原理是将样品复旦大学博士论文和对照品分别用重试剂和轻试剂标记后 将两样品混合、酶解 通过链亲和素柱 标记的肽片段吸附在链亲和素柱上。经洗脱后进行液相色谱一质谱分析。理论上所有多肽都有一段和它序列相同但质量不同的“对子这一质量差异正是同位素标记造成的 这些多肽的理化性质完全相同 在任何分离方法中的行为也相同。因此 在质谱图中一系列成对的高低质量峰间的强度比值就提供了初始蛋白混合物中多肽、蛋白质相对量的精确信息。相对目前其它蛋白质组研究方法 技术有如下优点 因为分离在肽段水平上进行 所以膜蛋白溶解性的问题得到解决 可以对膜蛋白进行鉴定和定量 通过选择标记含半胱氨酸肽段 降低了蛋白质混合物的复杂性 的含有半胱氨酸的肽段代表的蛋白 能够分析低丰度的蛋白质 并且在数据库中搜索结果时起限制作用 比较两种或更多种来源密切相关的蛋白质样品 可以得到不同状态下蛋白表达量的变化比例。来源密切相关的蛋白质的含量可互为对方的内部参照标准 对于含有多个半胱氨酸残基的蛋白质 通过重复检索含多半胱氨酸的肽段可得到肯定的鉴定和定量 因为 技术建立在色谱分离的基础上 任何促进蛋白质溶解的试剂均可使用 能够直接鉴定和测量低丰度蛋白质。目前 技术的缺点是只能对含有半胱氨酸残基的蛋白质测定 但含有半胱氨酸残基的蛋白质的量只占蛋白质总数的 所得蛋白质的量是一个相对值 还不能准确地反映细胞内蛋白质的真正含量 每一个 试剂分子的分子量为 相对少于 个氨基酸残基的肽段 分子量过大 所以会影响小肽段的鉴定 在标记过程中 高浓度 可影响 试剂与蛋白质或肽段结合啪 目的蛋白点的筛选对目的蛋白的筛选通常与双向电泳连用主要用来分析凝胶中分离出的蛋白质样品 采用的主要技术手段通常是 印迹和差异蛋白比较分析。 印迹主要是将双向电泳后的凝胶不经过染色而直接转印到固相支持物 再在膜上进行免疫学反应从而筛选出与免疫功能相关的蛋白 差异蛋白比较分析则是先对凝胶进行染色 然后应用软件 对存在差异的组凝胶进行比较 从而找出差异的蛋白。在比较时 通常要求每个被分析的样品重复 然后先做组内比较再做组间比较。 蛋白质的鉴定技术蛋白鉴定在蛋白组学工作流程中是一个重要的操作单元 而且是在对候选蛋白进行功能研究的最重要的一步。对于蛋白质鉴定而言 高通量、高灵敏度和高精度是三个关键指标嵋“。质谱技术 作为一种分析手段已出现几十年 但直到 年基质辅助激光解吸电离 、电喷雾电离 等软电离技术的出现才为分析强极性、热不稳定性和难挥发性的生物样品提供了可能。目前它已成为连接蛋白质与基因的重要技术 使大规模蛋白质自动化鉴定变为现实。随着质谱技术的不断改进和完善 质谱的应用范围已扩展到生命科学研究的许多领域 特别是质谱在蛋白质、核酸等领域的应用 不仅为生命科学研究提供了新方法 同时也促进了质谱技术本身的发展。质谱技术的基本原理是将样本分子离子化后在电场和磁场中飞行 根据离子间质荷比 的差异来分离确定蛋白质相对分子质量和特性。具有高通量、灵敏、准确、自动化等特点 已逐步取代传统的 降解测序和氨基酸组成分析 成为蛋白质鉴定的核心技术。在按照离子化方法分类 现常用的有 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱复旦大学博士论文 的基本原理是将微量蛋白质与过量的小分子基体的混合液体点到样品靶上经加热或风吹烘干形成共结晶 放入离子源内 当激光照射到靶点上时 基体吸收了激光的能力跃迁到激发态 导致蛋白质电离和气化 电离的结果通常是基体的质子转移到蛋白质上 然后由高电压将电离的蛋白质从离子源转送到质量分析器内 再经离子检测器和数据处理获得蛋白质的肽质量指纹图谱 。肽质量指纹谱是对蛋白酶解或降解后所得多肽混合物进行质谱分析的方法 是蛋白质被酶切位点专一的蛋白酶水解后得到的肽片断质量谱。由于每种蛋白质的氨基酸序列 一级结构 都不同 蛋白质被酶水解后 产生的肽片断序列也各不相同 其肽混合物质量数亦具特征性。然后应用适当的软件搜寻基因组和蛋白质组数据库 与多肽蛋白数据库中蛋白质的理论肽段进行比较 实现对蛋白质的定性鉴定 是将胰蛋白酶消化后的多肽混合物用电喷雾发离子化后进入串联质谱 从而进行多肽的测序 得出肽段的氨基酸序列 再通过数据库检索确定相应的蛋白质例。修饰的肽片段如含有氧化蛋氨酸 亦可被鉴定。被检测肽片段的质量与从基因组序列预测的相匹配 可认为未被修饰 若不能匹配 则可能存在某种特异性修饰‘删。现代质谱技术在高样品通量和功能上进一步加强 可以分析复杂的蛋白复合体具有很高的敏感性 通常可以达到 蛋白质更好的可以达到 使用电喷雾电离质谱甚至可达到 。另外 串联质谱技术拥有每个肽段的碎片离子信息 经过正确的描述能够提供原始蛋白的结构信息。虽然生物质谱技术已经在蛋白质组研究中获得了很大的成功 但也要清醒地看到 当前生物质谱技术在对低丰度蛋白质的检出能力 以及质谱数据的软件分析与综合上仍存在不足。生物质谱技术在蛋白质组学中的应用仍需要蛋白质化学修饰及同位素标记技术的发展。精度更高的质谱技术有望很快在蛋白质组研究中得到广泛应用。 蛋白质芯片技术蛋白质芯片 又称蛋白质微阵列 是上世纪 年代继基因芯片之后发展起来的一项研究蛋白质的高新技术 蛋白芯片分析本质上就是利用蛋白质之间的相互作用 对样本中存在的特定蛋白质进行检测。生物蛋白芯片技术是将位置及序列为己知的大量蛋白、多肽分子、酶、抗原、抗体以预先设计的方式固定在尼龙膜、硝酸纤维素膜、玻璃、硅片、聚丙烯酰胺凝胶等载体上组成密集的分子排列 当荧光、免疫金等标记的靶分子与芯片上的探针分子结合后 通过激光共聚焦扫描或光耦合元件 对标记信号的强度进行检测 从而判断样本中靶分子的数量以达到一次试验同时检测多种疾病或分析多种生物样品的目的 能够高通量地测定蛋白质的生物活性、蛋白质与大分子和小分子的相互作用 或者用于高通量定性和定量检测蛋白质 。目前 对吸附到芯片表面的靶蛋白的检测主要有两种方式 蛋白质标记法和直接检测法。前者将样品中的蛋白质预先用荧光物质或同位素等标记 结合到芯片上的蛋白质就会发出特定的信号 照相技术及激光扫描系统等对信号进行检测后者以质谱技术为基础 如由美国 公司在 年研发成功的表面增强激光解吸 离子化飞行时间质谱 。复旦大学博士论文 蛋白质芯片平台 是蛋白质芯片和质谱技术的结合 是集分离、纯化、鉴定、检测以及数据分析为一体的工具 主要由蛋白质芯片、芯片阅读器和生物信息学三大部分组成 可直接分析患者血清、淋巴液、脑脊液、尿液、细胞分泌液等样品而无需复杂的样品制备 引。但随着临床的广泛应用 研究人员发现 存在重复性差、不能直接鉴定等缺点。因此 年德国 公司成功改进和提高了 技术 用液体芯片技术取代固体芯片技术 即先在液态中用某种磁珠捕获特定蛋白。称为 技术 液体芯片一飞行时间质谱技术 。克服了 技术的缺点 同时具有 所没有的优点 如富集后的样品更易洗脱用于鉴定 技术的应用给肿瘤蛋白组学提供了有力的武器。利用蛋白质芯片技术能够进行配体受体检测多种感染因素筛查和肿瘤的诊断了解蛋白质与药物相互作用 从基因水平上寻找靶目标和靶向药物。因此 蛋白质芯片在肿瘤诊断、治疗和新的药物发现方面具有广阔的应用前景。 生物信息学 生物信息学是随着人类基因组计划、计算机技术和网络技术的发展而诞生的一门新兴学科 是在生命科学的研究中 以计算机为工具 运用信息学和数学理论方法来研究生命现象 通过对生物大分子信息的获取、加工、分类、检索、分析与比较 最终获得其生物学意义的一门科学和研究方法 引。生物信息学是蛋白质组学研究中不可缺少的一部分 在蛋白质组研究中主要应用有啪 构建分析双向凝胶电泳图谱 搜索与构建数据库 预测蛋白质结构 开发应用各种分析及检索软件。这些都极大地提高了蛋白质组学的研究效率。各种不同类型的蛋白质组和基因组数据库既是实现已知蛋白质分析鉴定和未知蛋白质发展的前提 也是分析蛋白质结构、性质和功能 实现模拟和预测的基础。如通过质谱发现的差异蛋白质靶点可以在数据库中进行比对 确定其理化性质 从而完成整个蛋白质组学的研究。目前用于蛋白质鉴定的数据库主要有以下几类 蛋白质双向凝胶电泳技术图谱数据库 蛋白质氨基酸序列数据库 蛋白质结构域与家族数据库 蛋白质高级结构及分类数据库 蛋白质相互作用数据库。蛋白质数据库的特点是种类繁多、更新速度快和网络共享程度高。最具代表性的是 是对数据人工审读很严格的库每条数据都有详细注释包括功能、结构域、翻译后的修饰等 以及齐全的引文和到许多其他数据库的链接。 库中的核酸序列翻译出来的氨基酸序列已经完成了自动注释。蛋白质组研究中使用的软件主要有以下几类 蛋白质双向电泳图谱分析软件 蛋白质鉴定软件 蛋白质结构和功能预测软件 利。目前已有相应的工具软件可供研究者使用 用于鉴定蛋白质种类、分析蛋白质理化性质、预测蛋白质可能的翻译后修饰以及三级结构。 蛋白质组学在肝癌研究中的应用原发性肝癌 以下简称肝癌 是临床上常见的消化系统恶性肿瘤之一 其中 为肝细胞肝癌 。在世界范围内 其发病率呈现上升的趋势。在欧美国家 肝癌已是第 位常见的恶性肿瘤 男性第 而中国、蒙古以及东南亚地区的发病率最高达到 万人。我国是肝癌大国 也是全球肝癌发病率最高的国家 每年全世界新发肝癌的一半以上发生在我国。全世界肝癌的死亡居恶性肿瘤死亡率的第 个月】。肝癌的主要病因包括乙肝、丙肝病毒感染、酗酒及摄入大量黄曲霉素等 其形成是一个多步骤、复旦大学博士论文多因素的过程 此过程包括一系列基因和蛋白质表达的变化 而有些基因或蛋白可用作 预后的标记咖】。目前 的生物标记只有五种应用于临床 而五种中只有甲胎蛋白 最为理想池 。近年来大量临床研究表明 诊断肝癌的敏感性和特异性仅分别为 而且在慢性肝病如肝硬化或慢性肝炎病性恶化时 水平也可能升高 这给临床决策极大的困惑 因此我们需要新的技术进一步寻找诊断 的既敏感又特异的早期生物标记 从而及时治疗。而具有高分辨率、高流通最的蛋白质组学为我们提供了这样一项新的技术。 细胞水平的蛋白组学研究体外培养的 细胞株具有稳定性和均一性 成分更为单一、可比性较强 能较好地模拟肿瘤的生物学行为 蛋白质组学的研究多集中于各种肝肿瘤细胞株的研究。 技术比较无转移的肝癌细胞 与具有转移潜能的 蛋白质表达谱的差异。分析了个差异蛋白点 其中 个被鉴定 包括钙依赖磷脂结合蛋白 与非转移性细胞系比较 高表达种蛋白低表达 说明各种蛋白质共同导致肝细胞癌转移。对差异蛋白 与肝癌转移的研究提示 通过增强肝癌细胞的运动侵袭能力和上调 的分泌 参与肝癌细胞的侵袭和转移过程。 选用株肝癌细胞系为研究对象 对提取的蛋白用荧光饱和标记染料 染色发现细胞周期调节蛋白、抑癌基因结合蛋白、脂肪酸结合蛋白、转录调节蛋白等在正常与癌细胞间差异显著 通过癌与癌旁组织标本 检测 指出增殖细胞核抗原、末端结合蛋白和脂肪酸结合蛋白表皮型在癌组织中过表达 并首次报道末端结合蛋白和脂肪酸结合蛋白表皮型的异常与肝癌有关。另外 他们还建立了肝癌细胞系叩双向荧光差异凝胶电泳的蛋白电泳图谱和数据库 并鉴定了个 个点对应的 种蛋白 比较了肝癌细胞系和可产生乙肝病毒的肝癌细胞系 的蛋白质表达谱 采用 和串联质谱进行分析鉴定 共发现 个差异蛋白质 这些蛋白按功能大致分为 维生素代谢相关蛋白、钙离子绑定蛋白、蛋白质降解相关蛋白。这些结果有助于揭示病毒性乙型肝炎与肝细胞肝癌的联系及相关性机制并为抗病毒治疗的研究提供了线索。刘博等 对比肝癌细胞系 和人正常肝细胞系 的蛋白质谱 发现在 细胞中去磷酸化蛋白的分子质量 表达较多 而在 细胞中磷酸化蛋白的分子质量 表达较多 个蛋白的分子质量相差 个磷酸根 推测分子质量 很可能是一对去磷酸化磷酸化蛋白。从而提示 肝细胞癌的发生和发展不仅仅涉及蛋白质数量和含量的变化 而且与一些蛋白质修饰的改变 例如磷酸化 密切相关。这种基因表达后的蛋白修饰变化也说明了进行蛋白质组学研究的特殊意义 进一步研究蛋白质的磷酸化 去磷酸化将有助于了解肝癌发生、发展过程和分子机制。为了更好地理解 的转移机制 寻找潜在的 的预后标记物。 应用不同转移潜能的细胞系 结合 分析。发现丙酮酸激酶泛素羧 细胞中表达上调而钙网织蛋白前体等在 中表达下调。进一步研究发嗡 在转移侵袭性更强的细胞中 的表达增加 提示 可能是预测肿瘤转移和 病人伴有转移治疗的有效靶点。 组织水平的研究利用肝细胞癌组织进行蛋白组学分析 能更真实地反映 的病理状态 是探讨肿瘤发生发展机制和寻找、鉴定有效的分子标志物的最直接和最有说服力的复旦大学博士论文途径障幻。 例肝癌组织和配对正常肝组织蛋白图谱进行分析发现表达量相差 倍以上 且至少在 的配对组织中均有相同变化的蛋白质点 、组织蛋白酶 和生长因子受体结合蛋白 和自身正常对照组织的蛋白表达图谱鉴定了 个肝癌组织和非癌组织中差异表达的蛋白质点 其中 种蛋白质在 相关性和非病毒相关性 种类型 中均有相同的变化趋势 而其余 种则存在病毒感染的特异性 相关性中表达下调 而在 相关性 中表达上调 相关性和非病毒相关性 中表达上调 而在 相关性 中表达无差异。宋海燕等腩 对比有转移的 组织和未发生转移的 组织的蛋白质组 发现 个蛋白质点的表达存在显著差异 包括 钙结合蛋白、细胞角蛋白 、热休克蛋白 等。其中 在转移性 组织中表达显著增高 可能为潜在的判断 转移的分子标记或控制转移的治疗靶点。 等嗨副在探索手术后 早期复发转移的指标中 例乙肝相关性患者为研究对象 采用 结合的蛋白组学手段 并通过逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹和免疫组织化学进行验证 发现相对于癌旁正常组织和正常肝组织 致死蛋白 组织中高表达。进一步研究有转移潜能的细胞系 亦发现 表达上调提示 转移相关可作为 患者复发的早期预测指标。 例外科手术切取的组织为研究对象包括 例不同分化等级的 组织、 例癌旁组织和 例正常肝组织 采用激光捕获显微切割技术 结合 和质谱技术 鉴定了 个差异表达蛋白质 其中 结合蛋白 在低分化的 组织中表达显著上调 进一步通过免疫组织化学证实 与肿瘤分化程度呈负相关 分化程度越低 表达量越高 提示 的预后估计有重要的意义。血清水平的蛋白质组学研究以血清为研究对象的蛋白质组学分析方法 被广泛用于比较肿瘤与非肿瘤患者的蛋白质组学差异及肿瘤候选标志物的检测 可以发现 患者血清中特异性更高、敏感性更好的蛋白质分子 并直接应用于 的早期诊断。 在一项利用双向电泳质谱分析 患者及正常对照组血清的研究中 发现补体 异构体表达水平在血清中明显降低。 等嘲。利用表面增强激光解吸电离一飞行时间质谱 技术分析肝硬化伴或不伴患者的血清 发现 个蛋白表达有差异。差异最大的是 蛋白的 末端片段 此蛋白与细胞粘附、转移均相关。 等璐钔利用双向电泳分离 病人以及肝硬化病人和正常人血清 经分析发现包括 在内的 多种蛋白出现 特异性的上调或下调表达。这些蛋白可能起着促进或抑制肝癌发生的作用。 等还对 病人的血清蛋白经阴离子交换两种类型蛋白芯片 鉴定。在个蛋白点中发现有 个点在慢性肝炎病人和 病人间存在显著差异。这些蛋白可能在慢性肝炎向肝癌转化中起到一定的作用。肝癌门静脉癌栓的形成与肝癌转移关系密切 所以 建立 病人门静脉癌栓形成相关的预测模型对肝癌转移的研究至关重要。 病人血清样品特异的血清蛋白或多肽模型通过 的检测决定筛选和门静脉癌栓形成相关的血清蛋白质组标记物 结果提示 复旦大学博士论文个蛋白分子标记物可能与肝细胞癌门静脉癌栓形成有关。 以肝细胞癌患者、慢性肝炎患者、肝硬化患者和正常人的血清为研究对像应用 和液相色谱串联质谱鉴定肿瘤相关抗原 共发现 个蛋白质 其中 个蛋白只存在于 的血清中 两个有代表性的蛋白 的蛋白组学研究手段分析 进行数据检索共鉴定出 个差异性蛋白质 按功能分为 信号转导、转录调节、蛋白质磷酸化修饰、细胞的黏附及转运的生物活性和免疫反应等。其中个蛋白在丙型肝炎肝硬化和早期丙型肝炎肝硬化 的比较中有显著差异性 为丙肝阳性肝硬化患者中的肝细胞肝癌的早期诊断 肿瘤标志物的发现提供了重要的信息。问题与展望蛋白质组学近十年来取得了很大的发展 要应用到具体的临床研究中还有一段距离。利用分子生物学技术对肝癌发病机制的研究产生了许多新的肿瘤标志物 但目前许多肿瘤标志物的临床价值尚不确定 并缺乏标准化的试剂、质量控制和测定方法。目前的研究大多数是回顾性的系统研究 所采用的方法学及样本的数量各不相同 应设计前瞻性试验方案来评估这些标志物的敏感性和特异性 及与肿瘤体积、临床分期、分级的相关性。此外 好的生物学标志应该在组织、体液 血清、尿液、胆汁等 中均能探测到。体液 特别是血液和尿液 是最容易获得的标本 对临床病人具有实用性 所以 未来的工作应努力寻找血液及尿液中的肿瘤标志物。蛋白质组学和基因芯片技术为探索新标志物提供了强有力的工具。在具体的生物标志物或者疾病靶标的研究中 有很多实验设计和技术问题需要解决嘲 如实验中涉及的样本量的大小、重复性分析、统计学分析等。另外一个更大的挑战是要整合蛋白质组学与其他组学信息 特别是基因组学和代谢组学。这样我们才能对各种癌症的致病过程进行整体分析 才能对不同的患者进行早期诊断和最佳治疗。相信随着这些问题的逐步解决 差异蛋白质组学技术将在癌症研究中发挥更大的作用。我们相信 随着人类基因组、蛋白质组的完善 分子生物学技术的进步及对肿瘤生物学的进一步了解 将发现越来越多高敏感性、高特异性的肿瘤标志物 并得到广泛的临床应用。参考文献【 以肝细胞癌患者、慢性肝炎患者、肝硬化患者和正常人的血清为研究对像应用 和液相色谱串联质谱鉴定肿瘤相关抗原 共发现 个蛋白质 其中 个蛋白只存在于 的血清中 两个有代表性的蛋白 的蛋白组学研究手段分析 进行数据检索共鉴定出 个差异性蛋白质 按功能分为 信号转导、转录调节、蛋白质磷酸化修饰、细胞的黏附及转运的生物活性和免疫反应等。其中个蛋白在丙型肝炎肝硬化和早期丙型肝炎肝硬化 的比较中有显著差异性 为丙肝阳性肝硬化患者中的肝细胞肝癌的早期诊断 肿瘤标志物的发现提供了重要的信息。问题与展望蛋白质组学近十年来取得了很大的发展 要应用到具体的临床研究中还有一段距离。利用分子生物学技术对肝癌发病机制的研究产生了许多新的肿瘤标志物 但目前许多肿瘤标志物的临床价值尚不确定 并缺乏标准化的试剂、质量控制和测定方法。目前的研究大多数是回顾性的系统研究 所采用的方法学及样本的数量各不相同 应设计前瞻性试验方案来评估这些标志物的敏感性和特异性 及与肿瘤体积、临床分期、分级的相关性。此外 好的生物学标志应该在组织、体液 血清、尿液、胆汁等 中均能探测到。体液 特别是血液和尿液 是最容易获得的标本 对临床病人具有实用性 所以 未来的工作应努力寻找血液及尿液中的肿瘤标志物。蛋白质组学和基因芯片技术为探索新标志物提供了强有力的工具。在具体的生物标志物或者疾病靶标的研究中 有很多实验设计和技术问题需要解决嘲 如实验中涉及的样本量的大小、重复性分析、统计学分析等。另外一个更大的挑战是要整合蛋白质组学与其他组学信息 特别是基因组学和代谢组学。这样我们才能对各种癌症的致病过程进行整体分析 才能对不同的患者进行早期诊断和最佳治疗。相信随着这些问题的逐步解决 差异蛋白质组学技术将在癌症研究中发挥更大的作用。我们相信 随着人类基因组、蛋白质组的完善 分子生物学技术的进步及对肿瘤生物学的进一步了解 将发现越来越多高敏感性、高特异性的肿瘤标志物 并得到广泛的临床应用。参考文献【 蛋白质组学理论与方法 定多种食品中三聚氰胺的残留量中国卫生检验杂志 黄志强周宁新 肝癌细胞系蛋白质组学初步分析 人肝细胞性肝癌组织转移相关分子的比较蛋白质组学研究中华肝脏病杂志 复旦大学博士论文致谢值此博士研究即将完成之际衷心感谢尊敬的导师王小林教授 在我五年的研究生学习期间 无论是工作中还是生活上 我的导师王小林教授都给予极大的帮助和关怀 而且在完成本课题研究中 无论从构思、设计、实施 还是到论文成稿 他倾注了无数心血 在此我要向导师对我的关怀和帮助表示深深的感谢。导师高尚的人格魅力、渊博的知识、严谨的治学作风、求实创新的科学态度、敏捷的科研思路和精湛的医术永远是是我学习的楷模 衷心感谢师母崔黎兰老师慈母般的关爱和教诲。师恩难忘 唯有加倍的努力奋进予以报答。衷心感谢导师组成员龚高全副主任医生、陈颐主治医师在本课题实验及临床方面给予的指导和帮助。衷心感谢复旦大学肝癌研究所刘银坤教授对实验和论文等各方面的指导。衷心感谢复旦大学生物医学研究院魏黎明老师 王益工程师在实验方面的指导和无私帮助。衷心感谢放射科王建华教授、颜志平教授、严复华教授、曾蒙苏教授、程洁敏副教授、丁建国副教授、王佩芬副教授、蒋亚平副教授、曾维新副教授、张兴伟副教授、吴东副教授、周建军副教授、吴卫平副教授、刘嵘副教授在临床和科研工作中的热忱帮助。衷心感谢介入科钱晟主治医师、李国平主治医师、刘清欣主治医师、瞿旭东主治医师、王平主治医师、周波主治医师、朱梁主治医师、刘凌晓主治医师、王成刚主治医生在临床工作中给予的无私帮助。衷心感谢介入手术室施惠斌老师、黄健峰医师及王燕萍老师、何蓓老师、袁新宇老师、付蓉老师在临床工作中给予的无私帮助。衷心感谢中山医院介入科李晓蓉护士长、及各位护士们给我的无私帮助和鼓励 感谢她们帮助我解决工作中的难题 衷心感谢放射科研究生熊壮、周大勇、马骏、张学彬师兄、姜波、施东华师弟及张雯、王颖颖、吴林霖师妹等在科研、临床上的鼎力相助。衷心感谢研究生科老师在三年的学习过程中的关心和指导。衷心感谢同窗室友王永刚、唐景粱、黄威、宗煜在学习和工作中、在论文写作中的互相勉励和帮助。最后感谢我的父母、妹妹、爱人及岳父岳母 他们的支持和鼓励是我求学的精神动力 并将激励我继续努力 复旦大学博士论文博士在读期间发表和投稿的论文 王小林蛋白质芯片技术在肝癌研究中的进展 复旦大学 医学版 已经录用 尚未发表 施东华应用液体蛋白质芯片飞行时间质谱技术研究肝癌门静脉癌栓形成相关标志物 在审

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